【技術(shù)】非瘟變異毒株采樣及檢測注意事項(xiàng)

自去年12月以來，各地非瘟爆發(fā)頻繁，這一波疫情來勢更為兇猛，而且北方發(fā)病嚴(yán)重程度超過南方，其中非瘟變異毒株成為眾多養(yǎng)豬人關(guān)注的熱點(diǎn)。本文提供一些思路供諸位養(yǎng)豬界同仁參考。

1、變異毒株感染組接種28天后對(duì)攻毒組和同居組豬只進(jìn)行檢測，資料證實(shí)檢出率以肺組織和扁桃體中含量最高，全身淋巴結(jié)以縱隔淋巴結(jié)檢測率最高。也就是說扁桃體檢測更有優(yōu)勢。

2、唾液中含有豐富的酶類，對(duì)核酸有降解作用，因此口腔拭子樣本要低溫保存、盡快運(yùn)輸、盡快檢測。溫度低是關(guān)鍵。

3、由于飼料殘?jiān)?、飲水中消毒劑?duì)檢測過程影響很大，豬只采樣前需要禁食12h，可以將口腔拭子放入含有DNA酶抑制劑的保護(hù)液中送檢。

4、非瘟檢測時(shí)應(yīng)采集EDTA抗凝的全血，臨床癥狀明顯期時(shí)，豬只會(huì)出現(xiàn)血液凝固不良，采血后造成滲血。

5、鼻拭子、咽拭子的采樣操作者需要佩戴乳膠手套后再佩戴一次性PE手套，選用長度大于20cm的長棉簽，采鼻腔液時(shí)建議兩根干燥棉簽同時(shí)采，棉簽深入鼻腔或口腔，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，徹底潤濕后取出。采集后的棉簽放入封口袋中。采集下一頭時(shí)需更換PE手套。采集后的樣本放入冰盒中，低溫保存，盡快運(yùn)輸檢測。

6、車輛、圈舍、地面等環(huán)境樣本的采集，可取無菌消毒大塊紗布多個(gè)在PBS液中浸潤，在取樣范圍內(nèi)進(jìn)行大范圍擦拭取樣，取樣范圍可設(shè)定為0.5mx0.5m，取樣結(jié)束后將紗布放入封口袋中，盡快進(jìn)行檢測。對(duì)車輛拖車地板、底盤、輪胎、駕駛室地板及方向盤用同樣方法采樣。

7、生活區(qū)及生產(chǎn)區(qū)按功能進(jìn)行分區(qū)采樣。收集環(huán)境樣本時(shí)要避免消毒劑的干擾。

8、非瘟檢測中ELISA抗體技術(shù)不是用于評(píng)價(jià)免疫效果，而是用于檢測是否有基因缺失毒感染，可用于進(jìn)苗、引種、清群和留種。因此今后實(shí)驗(yàn)室開展ELISA檢測將成為非瘟PCR檢測的一個(gè)重要補(bǔ)充。

9、當(dāng)前非瘟檢測環(huán)節(jié)仍然是人、車、飼料、水源、物資、粉塵（風(fēng)機(jī)的扇葉）、四害（鼠蚊蠅等）、路面及欄舍、排泄物等多方面，總體原則：多點(diǎn)收集，高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域加倍采樣，合樣檢測。

10、日常監(jiān)測重點(diǎn)監(jiān)測對(duì)象為人、車、物、料、水及疑似豬只。人員重點(diǎn)針對(duì)返場人員和司機(jī)，使用拭子或紗布，對(duì)手掌、指甲、指縫、頭發(fā)、鞋底、手機(jī)、電腦進(jìn)行采樣，每個(gè)人合樣檢測；車輛重點(diǎn)針對(duì)各類拉豬車、飼料車、私家車，對(duì)底盤、輪胎、車廂底、車廂壁、方向盤、中控臺(tái)、腳踏墊及蓬布進(jìn)行采樣，每輛車合兩個(gè)樣進(jìn)行檢測。

物資主要針對(duì)疫苗、藥品，使用紗布對(duì)外包進(jìn)行采樣，抽樣比例10%。飼料和飲水每批或每周檢測，飼料浸水后進(jìn)行富集，做到一樣一檢。疑似病豬采咽拭子和唾液進(jìn)行檢測，一豬一檢，檢測核酸和抗體，檢出陽性后立刻全群普檢或抽樣檢測。

11、非瘟野毒精準(zhǔn)剔除時(shí)檢測程序。挑選出疑似病例（靜默）  立刻確認(rèn)（靜默）第二次確認(rèn)后 精準(zhǔn)剔除（2-4天內(nèi)作消殺處理）一次性整體采樣檢測（注意區(qū)域劃分，重點(diǎn)區(qū)域增加采樣點(diǎn)，做到以豬為中心，合樣檢測）如有陽性，進(jìn)入下一個(gè)循環(huán)，直至檢測陰性。生產(chǎn)穩(wěn)定14天后，全群采血，進(jìn)行非瘟抗體檢測，剔除陽性豬只。

12、截止目前非瘟變異毒株檢測并沒有完善的程序，因?yàn)樽儺惗局隄摲陂L，難于發(fā)現(xiàn)，往往通過臨床癥狀發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)傳播開，但可多做現(xiàn)場排查與驗(yàn)證，核酸檢測多部位取樣（咽拭子、淋巴結(jié)），多靶基因檢測（P72\MGF\CD2v)，血液檢測抗體（取樣時(shí)避免交叉污染是關(guān)鍵），適當(dāng)提高檢測頻率。有條件的實(shí)驗(yàn)室可以開展P72\MGF\CD2v三重檢測。

13、建議每日異常豬采樣維持原來口腔液不變，同時(shí)對(duì)風(fēng)險(xiǎn)豬群進(jìn)行胎衣液拭子、咽拭子采樣，對(duì)死亡可疑豬可進(jìn)行肺臟穿刺采樣，采樣時(shí)注意防止交叉感染，采樣人員要反復(fù)培訓(xùn)直至熟練。對(duì)場內(nèi)采樣檢測出非瘟變異株的人員及時(shí)予以獎(jiǎng)勵(lì)。

資料來源：養(yǎng)豬職業(yè)經(jīng)理人

編輯：王茵

校對(duì)：王茵

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